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        小叮當口袋里的各種法寶令Western blots操作更快,更敏感,也更可靠。

Western Blot實驗操作進階技巧
       除非是Western blot實驗方面的高手,要不就像在我看來,Western blot發展至今好像與其1979年剛被發明出來的時候一樣一樣,同樣也是根據蛋白不同的大?。ɑ虻綰桑┙械纈痙擲?,然后轉膜,利用抗體篩選出目標蛋白。

       多年來這種技術已經成為了蛋白研究方面的一種主要技術,研究人員可以利用Western blot定性,甚至半定量的識別組織和培養細胞中的蛋白,這種操作實驗可以說每天都會在實驗室里上演,但同時,Western blot等blot技術也是各種審議的主題,學術造假,以及一些研究成果被退回的原因……




      減少樣品量


過去幾年里,研究人員已經邁出了檢測單個細胞中DNA 和 RNA的重要一步,相比之下,蛋白檢測已經落在后面。蛋白抗體質量不過關是主要的原因,這限制了研究人員在使用流式細胞儀和免疫細胞化學方法進行單細胞蛋白水平檢測的精確度。而且Western blot實驗需要分離得到蛋白,然而迄今為止這在單細胞中還無法做到。

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Western Blotting前傳:想成為高手嗎?[心得點評]



      實驗操作加速


從開始到結束,傳統的Western blot操作需要大約兩天半的時間,如果還要重做,加上樣品量很大的時候,真是會讓人崩潰?!拔乙魴磯郬B實驗,檢測所有的樣品,這真是費時費力,”來自加州大學舊金山分校的博士后研究員Jillian Silva說。

蛋白印跡新革命——7分鐘完成Western Blot
Western Blot實驗操作指南優化(中)



      蛋白內參


研究人員為了能定量分析目標蛋白,一般來說都會將其與溶液中的其它單一蛋白進行比對,如GADPH、 β-肌動蛋白或微管蛋白等,這些蛋白的表達水平量一般認為是維持不變的。

Western Blot實驗操作指南優化(上)[實驗技巧]


      傻瓜Western blot操作系統


Western blot技術發展至今,其繁瑣的步驟其實并沒有多大變化,雖然通過一些科學家們的優化,這些步驟有了些變化,但手工步驟越多,出錯的幾率也越大。因此研究人員希望能自動化這一過程。

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Western Blot實驗操作指南優化(下)





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